开云体育(中国)官方网站1500×g 离心 10 分钟取上清-开云(中国)Kaiyun·官方网站

本质运转前，抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体早已在微孔酶标板上设下 “罗网”。当加入 HCgp-39 校准品和待测样本时，HCgp-39 就像 “小谋划”，自动与抗体相连。接着，HRP 象征的抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体也加入其中，酿成踏实的 “夹心复合物”。经过温育和洗涤，去除未相连的因素后，加入底物 A 和 B，在 HRP 的催化下，底物从无色变为蓝色，再加入远离液（2M 硫酸），俄顷变成黄色。黄色越深，标明样本中的 HCgp-39 越多。终末，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），就能想象出样本中 HCgp-39 的浓度。

本质前，要提前 2 小时将试剂盒和样本从雪柜取出，使其在室温下充分复温。从雪柜取出的浓缩洗涤液若有结晶，放在温水浴中加热使其融解，再按 1:20 的比例用蒸馏水稀释。底物液 A 和 B 需在使用前按 1:1 的体积搀杂，且在 15 分钟内使用。

本质还需要酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶或自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱、500ml 量筒等物品。

样本网络后，细胞培养上清、血清、血浆王人要在 4000rpm 要求下离心 20 分钟，上清液保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。组织匀浆需用预冷 PBS 冲洗组织、剪碎后按 1:9 比例与 PBS 搀杂研磨，可超声幻灭或反复冻融，5000×g 离心 5-10 分钟取上清。细胞索要液的获得，贴壁细胞经 PBS 清洗、胰卵白酶消化后离心网罗，悬浮细胞径直离心网罗，细胞用 PBS 洗涤 3 次，重悬后反复冻融，1500×g 离心 10 分钟取上清。其他生物体液则在 1000×g 离心 20 分钟后取上清检测。

操作时，先配制好职责液，从铝箔袋中取出所需板条，剩余的密封放回雪柜。建造好范例品孔、0 值孔、空缺孔和样本孔，加入相应液体后，加入 HRP 象征的检测抗体，用封板膜盖住响应板，在 37℃避光孵育 60 分钟。之后进行洗板，若用自动洗板机，难忘添加 30 秒浸泡活动。将底物搀杂后加入各孔，再次避光孵育 15 分钟，终末加入远离液，在酶标仪 450nm 波长上读取 OD 值。

以范例品浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，用想象机软件拟合创建范例弧线方程，通过样本吸光度想象浓度值，若样本稀释过，需乘以稀释倍数。

使用试剂盒时，要在有用期内使用，不与其他厂家试剂盒或组分混用，用配套样品稀释液。操作经由中，幸免卵白溶液起泡，加样换枪头，保证温育技术和洗涤充分，扫视底物和远离液的使用要求，剩余板条密封低温干燥保存。同期，要扫视生物安全开云体育(中国)官方网站，推辞交叉羞耻，幸免试剂斗争皮肤和吸入烟雾，本质时戴手套，规模后洗手。